北京市人民政府关于国营和集体商业、服务业若干问题的试行规定
北京市政府
北京市人民政府关于国营和集体商业、服务业若干问题的试行规定
市政府
为了进一步调动国营、集体商业、服务业企业的经营积极性，改善服务态度，搞好市场供应，方便人民生活，提高经济效益，根据中央关于改革的方针和搞好首都商业、服务业的指示精神，现就国营、集体商业、服务业若干问题作如下规定：
一、进一步落实经营承包责任制
（一）承包内容。商业、服务业的经营承包责任制必须体现经济效益和社会效益并重的原则。承包内容要包括两个方面的指标，即：经济指标和服务指标。基层零售商业、服务业单位的经济指标一般应包括销售额（营业收入）、利润、费用、资金周转四项内容（粮食行业另定）；服务
指标包括执行政策、服务态度、便民项目、经营品种和安全卫生等内容。市、区、县公司（局、社）的承包内容包括销售额（营业收入）、利润和为基层服务等三项。
（二）承包方式。市属企业，以公司为单位，向市主管部门承包。区（县）属企业，以公司（局）为单位，向区（县）主管部门承包。基层企业，向上级主管公司承包。市供销社所属企业，继续实行全系统自上而下的逐级承包办法。承包要签订协议，保证兑现。企业内部可以采取多形
式多层次的承包，把经济指标和服务指标落实到门店、班组和个人。企业的经营承包要和企业领导干部任期目标责任制或领导岗位责任制配套落实，一并考核。
（三）承包基数。一九八六年的经济指标承包数，原则上以一九八五年六月至一九八六年五月的实现数作参考，考虑到今年的实际情况，如物价和市场需求变化等因素，本着既积极又留有余地的原则，由主管上级与承包单位研究商定，但要注意防止“鞭打快牛”。
（四）奖金分配。企业和职工的奖金分配，必须和经营承包任务完成情况紧密挂钩，经济指标和服务指标要分别考核，奖金使用一般可各占一半。发放奖金，对企业和职工都必须拉开档次，克服“大锅饭”、平均主义的弊端。
按四个月（集体企业五个月）标准工资不征奖金税的规定，以区、县、局（社、总公司）为计算单位。各区、县、局（社、总公司）要根据经济指标和服务指标考核标准，核定企业的奖金，超额完成承包任务的，可以在四个月标准工资奖金的基础上向上浮动，但一般不要超过两个月标
准工资，成绩特别突出，需要超过的，可报市财办批准；没有完成承包任务的，要在四个月标准工资奖金的基础上向下浮动。具体办法，由各区、县、局（社、总公司）制定。奖金的发放，必须量入为出，不经批准，不得动用其他基金发奖。
各区、县、局不征奖金税的水平，年底算总帐，如果突破四个月（集体企业为五个月），超出部分应交奖金税，奖金税的来源，市属企业由市财政和局（社、总公司）各负担百分之五十；区、县属企业，由市财政和区、县财政各负担百分之五十。
在企业内部，要适当扩大分配的浮动部分，把奖金、加时费、一定数量（由企业自定）的基本工资等捆在一起，同承包指标完成情况挂钩，进行分配。市、区（县）公司机关的奖金分配，也要和全公司完成经营承包指标的情况挂钩，不准拿平均奖，具体办法由区、县、局制定。
（五）考核制度。要逐级强化考核，建立严格的考核制度，全面考核经济效益和社会效益。要把主管上级和企业本身的考核，同多种形式和社会组织考核、顾客监督结合起来。区、县、局和公司、企业都要制定具体的考核办法，认真组织实施。
（六）职务津贴。门店经理和班组长的津贴，要同经营承包责任制挂钩。
一九八五年企业工资改革时，未列入小型企业工资等级线的独立核算门店的经理，根据企业大小和经营好坏，按月发给十至十五元的职务津贴，企业没有完成经营承包任务的不发。该项津贴在费用中列支。
企业的班组长，根据任务大小和工作好坏，按月发给五至八元津贴，在奖励基金中列支，免交奖金税。班组没有完成承包任务的不发。
二、进一步放宽微利和劳务性行业和政策
为了进一步调动企业和职工经营日用小商品、大众饭菜、粮食复制品等微利商品和从事理发、修理自行车等服务性劳动的积极性，方便群众生活，对这些行业采取以下政策：
（一）关于日用小商品。
1、国家规定放开价格的品种，除中央和市政府另有新规定者外，企业可以自行作价。
2、单独核算的小商品专店或专营柜组，必须制定出小商品目录（小商品的范围由市财办牵头制定）。在保证搞好必备商品供应的前提下，可以实行税前联销提成计奖的办法，由主管局（社）和财政、税务、劳动等部门根据实际情况确定百元销售额提成比例，允许在税前列支，不列为
奖金范围。对于扩大和增加供应小商品，受到群众赞扬、取得明显社会效益的，要予以鼓励，适当提高提成比例。
3、对税后人均留利不足五百元的小商品专店和专柜，由企业向财政、税务部门提出申请，经批准酌情减免营业税和所得税。
4、根据规定的品种范围，实行单独核算的小商品批发部或批发组，采取联购分销形式同零售店、组联营的，经批准可免征批发营业税，也可执行税前联销提成计奖的办法。
（二）关于理发行业。
1、理发行业要贯彻国家、集体、个人一起上的方针，尤其要大力推行各种形式的租赁制。既可以整店出租，也可以出租座椅及工具；既可以出租给本店和系统内职工，也可以租给社会上有本市户口、具有与本店同等技术水平、经医院检查无传染疾病的人员。租赁后经过批准可实行等
级差价，理男发收费可以适当浮动。
2、理发行业可以根据群众需要，开办理发“早市”、“夜市”，收入单独记帐，企业和职工实行全额分成，分成比例根据收入情况确定。
（三）关于饮食行业。
1、面食小吃的价格，在保证原材料供应的前提下，可以有指导地逐步放开，允许适当放宽毛利率。
2、为了增加低档炒菜的供应，可适当提高毛利率，同时要强化成本管理，坚决纠正成本核算偏高的错误做法。
3、原有和新建、改造的一二级饭馆，都要按主管部门规定，保持一定比例的大众化饭菜的供应。拒不执行的要降低饭馆的等级。
4、粮店在保证搞好平价粮供应的前提下，开展熟食和复制品加工业务，可单独核算，按饮食业办法，实行提成工资，返还所得税。提成工资在企业内部如何分配，由企业自定，但必须拉开档次，不能搞平均主义。
（四）关于修理行业。
1、修理行业的集体企业，凡从事修理业务的职工人数和营业面积都在百分之七十五以上，人均留利低于一般企业的（由企业主管部门与税务部门制定具体标准），可以给予适当减免税的优惠。
2、自行车修理行业全部实行租赁经营。修理价格已放开，各级管理部门不要再加限制，由企业自定。个人租赁（包括合伙经营）的，租赁者用自有资金发展企业所增加的收入，可向税务部门申请免征、减征个体所得税。集体所有制企业租赁后，退休职工的各项开支，在解决社会统筹
前，先由区公司内部统筹解决，不足的部分再申请减免税，予以照顾。
（五）关于集体企业。
集体所有制的小型企业，可以参照国营同类小型企业的规定实行租赁。以劳务为主的理发、浴池、饮食、服务、修理、眼镜钟表修配和服装零活加工等集体所有制的小型企业，也可参照国营同类小型企业的办法，实行全额分成工资或超额提成工资制，在税前列支，不计奖金税。
三、进一步搞活大中型企业
（一）尚未实行经理负责制的企业，凡是条件基本具 备的，都可实行经理负责制；条件尚不具备的，要积极创造条件，成熟一个实行一个。
（二）要继续扩大企业自主权，增加企业的活力，逐步使之成为自主经营、自负盈亏的经济实体。大力发展跨地区、跨部门、跨行业、跨所有制的横向经济联合，增加流通渠道，减少流通环节，发展新的商业形式。商业部门拥有的仓库和运输设施，要向社会开放，搞好两面服务。
（三）工资总额同企业效益挂钩的试点单位，再增加百货大楼、东风市场、天桥百货商场、新新服装店和东单、西单、崇文门、朝内、西河沿五个菜市场以及公主坟批发市场、百货公司、糖业公司、仿膳饭庄等企业。试点方式和挂钩内容可以有所不同。具体办法由市劳动局会同财政局
、税务局、企业主管部门与企业共同商定。
四、分批翻扩建危险破旧网点
（一）对商业、服务业网点进行一次普查。危险房屋和破旧房屋要有计划地分批翻扩建。有条件的可通过翻扩建加大营业面积，增设“五小”项目。
（二）翻建和翻扩建网点的资金，翻建部分全部由费用项目列支；扩建部分由企业自筹解决。微利行业自筹资金有困难的，由市财政予以补助。物资部门要尽量优惠供应所需“三材”。
五、建立优质服务奖励基金和评比奖惩制度
从今年起，市、区（县）政府和市主管局都要建立优质服务奖励基金，奖励服务成绩显著的商业、服务业企业和职工。市级按全市商业、服务业职工人数每年每人二元计算；区、县、局级按所属商业、服务业职工人数每年每人三元计算。基金来源由各级政府和企业共同筹集，企业分担
的部分，在留利中列支。基金的管理和评选奖励办法，由市委、市政府主管部门牵头，有关部门参加研究制定，经批准后实施。
对服务态度和服务质量发生严重问题的单位，按其严重程度和造成的影响，一次可扣罚五十元到五百元，在企业奖励基金中支出，上交区、县、局优质服务奖励基金管理部门，作为优质服务奖金使用。对个人的处罚由企业决定。
六、逐步改善职工的生活和工作条件
（一）采取多种措施缓解职工住房困难。
1、凡税利包干任务在区（县）的商业、服务业企业，其职工宿舍的困难问题由区、县负责逐步安排解决。基建指标直接下达到区、县，建房用地由规划部门安排。
2、对无建房能力的小型企业，市政府今年和明年各拿出二万平方米住宅，由区商业主管部门负责首先分配给住房困难、服务好的职工。对完全自费建房有困难的基层企业，采取每建一平方米，由市、区政府各补助一百元的办法，从一九八七年起每年安排十万平方米，暂定五年。对完
全无力建房的小型企业，也要逐年安排建设一些住宅，资金由市、区各承担百分之五十。
（二）没有条件办职工食堂，又未发饭费补助的企业，可按职工出勤一天发给二角五分的饭费补助。
市政府各有关委、办、局、总公司，各区、县人民政府，在接到本规定以后，要立即组织贯彻执行。以前市政府和各有关部门颁发的规定，凡与本规定不一致的，一律以本规定为准。
1986年7月15日
关于进境鸵鸟检疫有关问题的通知
动植物检疫局
关于进境鸵鸟检疫有关问题的通知
（动植检动字〔１９９６〕８７号）
各直属口岸动植物检疫局、动物检疫所：
近年来，鸵鸟的引进和繁养在我国呈现了迅猛发展的势头，为满足引进鸵鸟及其种蛋的需要，一年多来，我们先后与美国、加拿大、法国、荷兰、津巴布韦、博茨瓦那、澳大利亚和纳米比亚签署了进境鸵鸟的检疫和卫生条件议定书，从而为引进鸵鸟在检疫方面铺平了道路。随着鸵鸟的大量引进，我们的检疫工作也日趋繁重，而鸵鸟的检疫在我国还是个崭新的课题，为总结近年来进境鸵鸟的检疫经验，进一步提高检疫水平，防止疫病随进口鸵鸟及其种蛋传入我国，使鸵鸟的检疫工作更加规范化和标准化，保证进境鸵鸟检疫工作的顺利进行，现就进境鸵鸟及其种蛋入境后的检疫工作的有关问题通知如下：
一、进境鸵鸟检疫
1．鸵鸟入境后须在口岸动植物检疫局指定的隔离场所进行为期45天的隔离检疫
，如须延长隔离检疫时间，须报国家局批准。
2．鸵鸟运抵隔离场一周后，逐只进行采血采样，并分成两份，其中一份保存备
查，并注意编号。
3．隔离检疫期间的实验室检疫项目，主要依照我国与输出国缔结的鸵鸟检疫议
定书规定的实验室检疫项目进行。如发生特种情况可做特殊检疫项目。
4．实验室检疫的操作试行程序附后。
二、进境鸵鸟种蛋检疫
1．进境种蛋的孵化厂须获得口岸动植物检疫机关的认可。
2．进境鸵鸟种蛋在入孵前，须用有效的消毒药进行熏蒸处理。
3．进境种蛋不得与其他种蛋一同孵化。
4．首次孵出的小鸟须在口岸动植物检疫机关认可的场所由口岸检疫机关隔离检
疫30天，在此期间采样并依照我国与输出国缔结的鸵鸟种蛋的检疫议定书规定的项目作实验室检疫。
三、其他未尽事宜按《进境动物检疫管理办法》执行。
四、在执行过程中有何问题，请及时上报国家局。
附件：鸵鸟疫病实验室检疫操作试行规程
中华人民共和国动植物检疫局
一九九六年八月二十六日
鸵鸟沙门氏菌泄殖腔拭子培养规程（试行）
一、材料：
灭菌棉拭子、缓冲蛋白胨水、亚硒盐胱氨酸增菌液、胆硫乳琼脂、三糖铁琼脂、生化试验管、多价血清因子、细菌培养必需设备。
二、操作方法：用无菌棉拭子从泄殖腔取样，放无菌瓶中，尽可能冷藏于2～4℃，编号后送实验室检验。
三、实验室检验：
┌────────┐
│ 棉拭子样品 │
└─┬──────┘
│
┌─────┴─────┐
│ 缓冲蛋白胨水 │
└───┬───────┘
３７℃ │１８￣２４hr
┌──┴───────┐
│ 亚硒盐胱胺酸增菌液 │
└─┬────────┘
３７℃│ １８￣２４hr
│
┌───┴───┐
│ ＤＨＬ培养基 ├────────────────┐
└─┬─────┘ │
┌──┴───────┐ ┌──┴────┐
│挑取可疑菌落划线接种│ │ 可疑菌落 │
└────┬─────┘ └──┬────┘
│ │
┌───┴────┐ │
│ 三糖铁培养基 │ │
└──┬─────┘ ┌────┴──────┐
│ │ 革兰氏染色，镜检 │
３７℃ │ １８￣２４hr │ │
│ └────────┬──┘
┌─┴──┐ │
┌─┤细菌鉴定├───┐ │
│ └────┘ │ │
│ │ │
┌┴───┐ ┌─┴──────┐ │
│生化试验│ │ 血清学试验 │ │
└─┬──┘ └┬───────┘ │
│ ┌┴─────┐ │
└───────┤综合判定结果├─────────────┘
└─┬────┘
┌─┴────────┐
│ 试验结果报告 │
└──────────┘
鸵鸟鹦鹉热间接血凝（IHA）操作规程（试行）
一、本规程适用于鸵鸟衣原体病的诊断。
二、材料
衣原体属抗原致敏绵羊红细胞
标准阴、阳性对照血清
被检血清：采集鸵鸟血清，试验前于56℃水浴灭活30分钟。
90度V型反应板
灭菌生理盐水
微量加样器
三、试验方法
1．将生理盐水滴于V型反应板中，每孔50ul。
2．取被检血清50ul于第一孔中，与生理盐水混匀后吸50ul于第二孔，依次作倍
比稀释至1∶16。
3．将1∶8和1∶16两孔各加25ul抗原，如作定量试验可根据实际需要自行决定。
4．对照试验：设阳性血清＋抗原、阴性血清＋抗原、生理盐水＋抗原各一孔。
四、血凝反应程度的标准：
“＋＋＋＋”：红细胞全部凝集，形成一层均匀的膜，布满整个孔底。
“＋＋＋”：红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者稍小。
“＋＋”：红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状。
“＋”：红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点。
“＋”：红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。
“—”：红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。
“＋＋”以上的凝集判为阳性凝集。
五、结果判定
1．对照试验：出现如下结果试验方可成立，否则应重试，阳性血清＋抗原呈“
＋＋＋＋”；阴性血清十抗原呈“-”；抗原十生理盐水
2．被检样品判定标准：血清效价＞1∶8（＋＋）判为阳性。
鸵鸟新城疫、禽流感、付粘病毒分离操作规程（试行）
本规程适用于新城疫、禽流感、付粘病毒的分离
一、材料
1．消毒棉拭子
2．灭菌试管
3．灭菌生理盐水
4．泄殖腔棉拭子保存液：PBS，PH7．2-7.4，青霉素1万单位／ml，链霉素10mg/m1，庆大霉素250ug/ml，制霉素5000u／ml。
5．SPF种蛋。
6．90度V型反应板。
7．微量加样器。
二、操作方法
1．将采集的泄殖腔棉拭子置于样品保存液中，置4℃过夜。次日3000rpm离心10min，上清液作菌检后接种9～10日龄鸡胚（每胚0．2ml），37℃再孵育5天，去掉24小时死亡的鸡胚，其他鸡胚放4℃冷却后，检测鸡胚尿囊液的血凝滴度。如尿囊液
的血凝反应呈阴性，应再用鸡胚盲传2代。
2．将收集的尿囊液用PBS以25ul量进行倍比稀释，加25ul的1％鸡红细胞，轻轻
混匀，静置15～30min，判定血凝滴度。
如鸡胚尿囊液的血凝试验呈阳性，应分别用新城疫病毒、禽流感病毒、副粘病毒的阳性血清作血凝抑制试验以检测病毒的种类。
表一 鸡胚尿囊液血凝试验 （单位：ul）
┌─────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬───┬────┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│抗原稀释度│ 1∶2 │ 1∶4 │ 1∶8 │1∶16 │1∶32 │ 1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│ 生理盐水│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│ 抗原 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│1％红细胞 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25 │
└─────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴────┘
室温15min，每5mim观察一次
┌─────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬───┬────┐
│ 判定举例│++++ │++++ │++++ │+++ │ ++ │ - │ - │ - │ - │ - │ - │ - │
└─────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴────┘
禽流感血凝抑制试验操作程序（试行）
一、试验材料
1．抗原：禽流感病素H5、H7型抗原；
2．阴、阳性对照血清。
3．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000rpm离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
4．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
5．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽流感血凝试验 （单位：ul）
┌─────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│抗原稀释度│ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
└─────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温15min，每5min观察一次
┌─────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 判定举例│ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ - │ - │ - │ - │ - │
└─────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
抗原的血凝滴度是凡能使1％的鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数；因此，
能使红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒液25ul称为1个血凝单位（HA）。如该抗
原的血凝单位为1∶128／25ul。
在进行禽流感血凝抑制试验时，病毒的工作浓度应为8HA。因为该试验的抗原的
血凝单位为1∶128／25ul，按其孔号数（孔．7）倒退3孔的稀释倍数（孔4 1∶16）
，作为该病毒的工作浓度：1∶16／25ul。
2．血凝抑制试验（HI）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表二进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加待检血清25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔8，孔8混匀后吸出25ul弃掉。孔9作为阳性血清对照，孔10作为阴性血清对照，孔11不加任何血清而作为抗原对照，孔12不加抗原和任何血清，只加PBS作空白对照。各孔加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
未免疫的健康鸵鸟血清无血凝抑制作用，各稀释倍数均出现红细胞凝集现象；禽流感感染或免疫的鸵鸟血清能抑制禽流感病毒对红细胞的凝集作用。凡能使8HA的
抗原凝集红细胞作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的血凝抑制价（如表二的血凝抑制价为1∶64）。
表二 禽流感血凝抑制试验 （单位：ul）
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│血清稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│ 1∶16 │ 1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 阳性 │ 阴性 │抗原 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 75│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 被检血清 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ (25)│ (25)│ │ │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 8HA抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ │
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温感作5～6min
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温15min，每5min观察一次
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 判定举例 │ - │ - │ - │ - │ - │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
3．判定标准
1）判定时应首先观察各对照孔是否完全符合；
2）红细胞凝集：红细胞分散在孔底四周呈均匀的颗粒状凝集且布满整个孔底，
判为血凝作用为阳性“十”；
3）无凝集或凝集抑制：红细胞集中于孔底中央呈点状，判血凝作用为阴性“—
”，或判血凝抑制作用为阳性；
4）血凝抑制价：凡能使抗原的血凝作用完全受到抑制的最高血清稀释倍数；
5）被检血清的血凝抑制价在1∶8以上者，判为阳性反应；
6）最后判定时间与感作时间有关。温度高时感作时间短，15min即可；温度低时可适当延长，但最长不得超过30min。
禽流感琼脂扩散试验操作规程（试行）
1．琼脂凝胶平板的制备：称取琼脂糖1g，氯化钠8．5g，加入100ml蒸馏水，10磅10分钟高压溶解后，冷却至45℃，加入0．01％叠氮钠，每个直径6CM平皿加7ml融化琼脂，厚度为2．8mm，待凝固后置冰箱内片刻。
2．打孔：中间一孔，周围六孔为一组，孔径3mm，孔居2．5mm。
3．加样：中心孔加抗原，周围1、3、5孔加阳性血清，2、4、6孔加被检血清。
4．加样后置湿盒内，于室温下感作。
5．结果判定：24小时初判，48小时终判，阳性对照成立时，进行判定。
阳性：被检血清孔与抗原孔之间出现致密沉淀线，并与标准阳性血清的沉淀线末端互相联接。
可疑：标准阳性血清孔和抗原孔之间的沉淀线向被检血清孔内侧弯曲。
阴性：抗原孔与被检血清孔之间不出现沉淀线或标准阳性血清与阳性孔间的沉淀线向毗邻的被检血清孔直伸或其外侧偏弯。
禽副粘病毒血凝抑制试验操作程序
一、试验材料
1．抗原：禽副粘病毒病毒Ⅱ型抗原；
2．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释
成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
3．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
4．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
5．阴、阳性对照血清
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽副粘病毒血凝试验 （单位：ul）
┌──────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬─────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼───┼───┤
│抗原稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│ 1∶1024 │对照 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼───┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼───┼───┤
│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
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